Cascade-crRNA complex, hB2M
Cascade-crRNA複合体（ヒトB2M遺伝子）| 品名 | Code No. | 包装単位 | 価格 | 備考 |
|---|---|---|---|---|
| Cascade-crRNA complex, hB2M | 312-09471 | 250 µg | 98,000円 | |
製造元 （株）ニッポンジーン
表示価格は希望納入価格 (税別) です。
製品説明
本品は、CRISPR-Cas3ゲノム編集用のCascadeタンパク質とCRISPR RNA (crRNA)の複合体で、複数の核移行シグナル(NLS)が付与されています。crRNAはヒトのbeta-2-microglobulin(B2M)遺伝子を標的としています。Cas3 protein NLSと組み合わせると、標的配列を含むDNAを切断することができます。
本品は特定の実験系において、ヒトB2M遺伝子に対してゲノム編集効果が確認されています。CRISPR-Cas3システムの実験系を新しく立ち上げる際に、本品とCas3 protein NLS を組み合わせて予備実験に使用することができます。
本品「Cascade-crRNA complex, hB2M」（Code No. 312-09471）は、ヒト細胞に恒常的に発現しているhB2M遺伝子を標的としております。一方、「Cascade-crRNA complex, EGFP」（Code No. 312-09611）は、レポーター遺伝子として汎用的に使用されているEGFP遺伝子(Mammalian codon-optimized) を標的としておりますので、様々な生物種での実験系で広く使用できる可能性があります。
特長
● CRISPR-Cas3システムの実験系立ち上げの際の予備実験に使用可能
● ヒト beta-2-microglobulin（B2M）遺伝子を標的としたCascade-crRNA複合体
● 本品とCas3 protein NLSを組み合わせることで標的配列を含むDNAを切断することが可能
● 核移行シグナル（NLS）を付与
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製品内容
| 構成品 | 容量 | 保存 | 備考 |
|---|---|---|---|
| Cascade-crRNA complex, hB2M | 250 µg x 1本 | -80°C | 起源：遺伝子組換え大腸菌 分子量：396,819 (アミノ酸配列より算出) 濃度：25 µg/µL Cascade-crRNA complex, hB2M 形状：20 mM HEPES-NaOH (pH 7.0), 350 mM NaCl |
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使用例
使用例1 細胞でのゲノム編集評価 （データ提供：C4U株式会社）
Flow CytometoryによるB2M遺伝子のノックアウト（KO）率
Cas3 ‒ Cascade-crRNA複合体を導入した試験区では平均して
18.1%の細胞にB2M遺伝子が発現していないことを確認した。(n=3)
β2-ミクログロブリンをコードするB2M遺伝子をターゲットとして実験を行った。エレクトロポレーション法でHEK293T細胞へCas3 protein NLS（Code No.311-09441）及びCascade-crRNA complex, hB2M（Code No.312-09471） を導入し、培養3日後にFlow CytometoryでB2M遺伝子のノックアウトをHLA-A抗体を使って確認した。また、B2M遺伝子がどの程度欠損が起きているかをクローニング及びシーケンス解析により確認した。
＜実験方法＞
1. RNP（Cas3 ‒ Cascade-crRNA複合体） 各種を調製
2. 細胞懸濁液を用意（0.3 x 106 cells/well）
3. エレクトロポレーション（下記：実験条件）
4. エレクトロポレーション後、3 日目にFlow CytometoryでB2M遺伝子の発現を測定
5. KO率を計算
＜実験条件＞
【エレクトロポレーター】 4D-Nucleofector® (Lonza社)
【Pulse Code】DG150
【細胞】HEK293T細胞, 0.3 x 106 cells/well
【RNP】100 pmol each/well (6 well plate)
シーケンス解析による欠損領域の確認
B2M遺伝子がどの程度欠損が起きているか、TAクローニングおよびシーケンス解析により確認した。
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使用例2 in vitro での基質DNAの切断確認
Cas3 protein NLS および Cascade-crRNA複合体を用いて、PAMと標的配列を含むPlasmid DNAの切断確認を行った。
＜反応系＞
5 mM HEPES-KOH (pH 7.5),
60 mM KCl,
10 mM MgCl2,
10 µM CoCl2
2.5 mM ATP,
0.24 µM Cas3 protein NLS,
0.20 µM Cascade-crRNA複合体,
100 ng Plasmid DNA
＜反応条件＞
37°C、5分間反応
↓
SDS含有のLoading Buffer(Code No. 313-90111)を添加し、
アガロースゲル電気泳動
1% Agarose S
M : Gene Ladder Fast 2
[参考文献] Yoshimi, K. et al.:Nature Communications, 13:4917 （2022）
結果 PAMおよび標的配列を含むPlasmid DNA（レーン１）において切断を確認した。一方、非標的配列を含むPlasmid DNA（レーン3）において切断は確認されなかった。
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資料 Data Sheet
製品マニュアル
SDS(Safety Data Sheet)
リーフレット
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関連情報
ライセンス
- 本品はC4U 株式会社とのライセンス契約をもとに製造、販売を行っております。
備考
- 本品は東京大学医科学研究所 先進動物ゲノム研究分野の真下知士先生、吉見一人先生、理化学研究所放射光科学研究センター（生物系ビームライン基盤グループ） の竹下浩平先生の技術支援のもとに開発されました。
- 本品は試験研究用試薬です。医薬品の用途には使用しないでください。
関連製品
問い合わせ先
- 購入に関するお問い合わせ先
- 富士フイルム和光純薬株式会社および同社代理店・特約店
- 富士フイルム和光純薬株式会社 製品検索サイト
- 製品に関するお問い合わせ先
- 株式会社ニッポンジーン 学術営業課
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