Bst DNA Polymerase

鎖置換型酵素

品名	Code No.	包装単位	価格	備考
Bst DNA Polymerase	311-07481	1,600 units	11,000円

製造元（株）ニッポンジーン

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

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製品説明

本品は、5’→ 3’DNA ポリメラーゼ活性と鎖置換活性を有し、鋳型となる二本鎖DNA の水素結合を自ら解離しつつ、新しいDNA 鎖を合成する酵素です。耐熱性鎖置換型DNA ポリメラーゼは、その特性から二本鎖DNA の解離を必要としないため、一定温度でのDNA 合成が可能であり、またDNA の二次構造による合成阻害を受けません。

特長

・5’→ 3’DNA ポリメラーゼ活性および鎖置換活性を有する・一定温度でのDNA合成が可能・GC含量が高いDNA鎖の合成に適している・DNAの二次構造による阻害を受けない

用途

鎖置換活性を利用したアプリケーション（等温遺伝子増幅法など）

*Bst* DNA Polymerase
至適反応温度	60°C～ 65°C
*失活時間^1**	80°C、5 分間

*1 酵素原液をそのまま直接熱変性した場合の失活温度

起源	Geobacillus stearothermophilus
活性	8 units/μl
単位の定義	1 unit は、仔牛胸腺DNA をプライマー/ 鋳型として、65°C、30 分間に10 nmol のdNTP を酸不溶性沈殿物に取り込む酵素活性とする。
形状	10 mmol/l Tris-HCl（pH 7.5）, 1 mmol/l DTT, 0.1% Tween 20, 0.1 mmol/l EDTA, 50% Glycerol
酵素反応条件	10 倍濃度の酵素反応専用バッファー（0.5 ml × 1 本）を添付している。例えば、反応容量が50 μl の場合には酵素反応専用バッファー5 μl を加える。
備考	アプリケーションによっては、ライセンスが必要となる場合があります。

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製品内容

*Bst* DNA Polymerase（1,600 units）
構成品	容量	保存	備考
Bst DNA Polymerase（8 units/μl）	200 μl x 1	-20°C
10 × Bst Reaction Buffer（80 mmol/l Mg²⁺）	500 μl x 1	-20°C

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使用例

実験例1　LAMP法への利用

3.0% Agarose 21
TAE ゲル電気泳動
エチジウムブロマイド染色

M： Gene Ladder Wide 1
1： A 社 Bst DNA Polymerase
2：当社 Bst DNA Polymerase

LAMP法反応条件
Candidatus Liberibacter asiaticus DNA	1 x 10⁶ copies
FIP^*	40 pmol
BIP^*	40 pmol
F3 Primer^*	5 pmol
B3 Primer^*	5 pmol
Loop Primer F^*	20 pmol
Loop Primer B^*	20 pmol
dNTPs Mixture	1.4 mM each
10 × Bst Reaction Buffer	2.5 µl
Bst DNA Polymerase	8 units
Total	25 µl

反応
65°C	60分間

* プライマー配列
	FIP: 5'-GCATGCCGAGGATCAATGCCTTGCTTAAAGAGCGTGCTACG-3' BIP: 5'-TATGCCTAATGGCACGGGGGTAAGCTTCATCCGCCTTCGA-3' F3 Primer: 5'-TGGGTTAAGTGATGCTGTGG-3' B3 Primer: 5'-CAACAATATCAGCCCCTGCT-3' Loop Primer F: 5'-TCTCAACTGTTTCATCAAACCTAGC-3' Loop Primer B: 5'- CGTGGCGGTTTTTGCTACA-3'

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実験例2　RCA法によるBst DNA Polymeraseの耐熱性と至適反応温度の評価

rca image

RCA法反応液組成
M13mp18 single strand DNA	40 ng
Universal primer	50 nM
dNTPs Mixture	1.4 mM each
Tris-HCl (pH 8.8 at 25°C)	20 mM
KCl	10 mM
(NH4)2SO4	10 mM
MgSO4	8 mM
Tween 20	0.1%
Betain	0.8 M
Bst DNA Polymerase	4 units
全量	20 µl

反応条件
各温度にて	30分間

結果

レーン
M： Gene Ladder Wide 1 (Code No. 313-06961)
D：鋳型 DNA (M13mp8 single strand)

プライマー配列 （Universal Primer）
5'-GTTTTCCCAGTCACGACGTTGTA-3'

電気泳動条件
0.7% Agarose S / TAE ゲル電気泳動
エチジウムブロマイド染色
SDSが含まれていないLoading Bufferを使用

備考
本実験は2種類のBst DNA Polymerase を比較するために同じ反応液組成で反応させました。RCA法に各酵素に添付の専用バッファーを使用する場合は、「鋳型DNA、プライマー、dNTPs Mixture、専用10x Buffer、Betain、DNA Polymerase」を添加する反応系でまずはご検討ください。