Blunting-Convenience Kit

フラグメントの平滑化とライゲーション

品名	Code No.	包装単位	価格	備考
Blunting-Convenience Kit	312-06291	25 回用	20,000円

製造元　（株）ニッポンジーン

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

製品説明
製品内容
使用例
Q & A
資料 Data Sheet
関連情報
問い合わせ先

製品説明

Blunting-Convenience Kit はDNA 末端の平滑化とライゲーション反応を簡単、迅速に行うことができるキットです。T4 DNA Polymerase はPolymerase 活性と3′→ 5′Exonuclease 活性を持ち、DNA 末端を効率よく平滑化することができます。また、ライゲーション試薬の2 x Ligation Mix はLigation-Convenience Kit と同じものであり、平滑末端ライゲーション反応も16°C、5 ～ 30 分間で効率よく行うことができます。

特長

・短時間（37°C、5 分間）で高効率なDNA 平滑化が可能（DNA末端形状かかわらず）・短時間（16°C、5～30 分間）で高効率な平滑末端ライゲーションが可能・ライゲーション反応終了液をそのまま形質転換に使用可能・平滑化反応、ライゲーション反応共に、標準反応スケールは20 µl

▲このページのトップへ

製品内容

使用回数

包装単位は 20 µl反応系での使用回数です。

Blunting-Convenience Kit（25回用）
構成品	容量	保存
T4 DNA Polymerase	25 µl x 1 本	-20°C
10 x Blunting Buffer	50 µl x 1 本	-20°C
2 x Ligation Mix	250 µl x 1 本	-20°C

融解方法の注意

失活を避けるため、T4 DNA Polymerase は絶対にボルテックスしないでください。
2 x Ligation Mix は、使用時に氷上にて完全に融解させ、ピペッティングでよく混ぜてから使用して下さい。
2 x Ligation Mix は、50 回までの凍結融解による反応効率の低下は認められておりません。

▲このページのトップへ

使用例

プロトコール

（1）平滑化反応液の調製 5’突出末端、3’突出末端及びPCR 産物など、末端を平滑化したいDNA（DNA 末端濃度で0.1～10 pmol)を17 µlに調製する。次に、10 x Blunting Buffer を2 µl 加え混合する。
（2）酵素の添加 T4 DNA Polymerase を1 µl 加え、ピペッティングで混合する。
（3）平滑化反応 37°Cで5 分間反応させる。
（4）反応の停止平滑化反応液を氷中に置き反応を停止する。すぐに使用しない場合はフェノール/クロロホルム/イソアミルアルコール抽出、エタノール沈澱を行い－20°Cで保存する。
（5）ライゲーション反応液の調製平滑化反応液、平滑末端DNA ベクター溶液を合わせて10 µl のDNA 溶液を調製する。10 µl の2 x Ligation Mix を添加し、混和する。
（6）ライゲーション反応 16°Cで5～30 分間反応させる。
（7）形質転換反応液をそのまま形質転換に用いる。

実験例1　ベクター平滑化の有無による形質転換効率の比較

EcoR l （5′末端突出）とPst l （3′末端突出）でDouble digestion したpUC19 DNA について、本キットを用いて平滑化（37°C、5 分間）、ライゲーション（16°C、30 分間）を行い、大腸菌の形質転換を行った。未切断のpUC19 DNA によって得られる形質転換効率を１として、平滑化あり、なしの場合の形質転換効率を相対値でグラフに示した。

data1