Pho DNA Polymerase

高正確性酵素

品名	Code No.	包装単位	価格	備考
Pho DNA Polymerase	314-07111	250 units	27,500円

製造元　（株）ニッポンジーン

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

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製品説明

本品は、超好熱菌Pyrococcus horikoshii OT3 由来の耐熱性DNA Polymerase です。5’→ 3’exonuclease 活性は有していません。
3’→ 5’exonuclease 活性（校正活性）を有しているため、得られるPCR 産物は平滑末端です。必要に応じてリン酸化した後に、平滑末端のベクターにライゲーションできます。また、変異の頻度はPol Ⅰ型よりも10 倍程度低く、合成の忠実度が高いため正確な増幅が必要とされるPCR に適しています。

特長

・3’→ 5’exonuclease 活性（校正活性）を持ち、PCR 産物は平滑末端・合成の忠実度が高く、正確性の高いPCRが可能・長鎖DNA やGC 含量の高いDNA を増幅可能・PCR の阻害物質であるSDS の影響を受けにくい・PCR 変性温度92℃～ 98℃で酵素失活は認められない

用途

ロングPCR
GCリッチ鋳型のクローニング

活性	2.5 units/μl
形状	50 mmol/l Tris-HCl（pH 8.0）, 100 mmol/l NaCl, 1 mmol/l DTT, 0.1 mmol/l EDTA, 50%（v/v）Glycerol, 0.1% Triton X-100
単位の定義	1 unit は、activated calf thymus DNA をプライマー/鋳型として、74℃、30 分間に10 nmol のデオキシヌクレオチドを酸不溶性沈殿物に取り込む酵素活性とする。
純度	本酵素10 units と1 μg のpBR322 DNA とを74℃、1時間反応させてもアガロースゲル電気泳動パターンに変化は認められない。

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製品内容

Pho DNA Polymerase (250 units)
構成品	容量	保存
Pho DNA Polymerase (2.5 units/µl)	250 units x 1	-20°C
dNTP Mixture (2.5 mM each)	800 μl x 2	-20°C
10 x Pho Reaction Buffer (10 mM Mg²⁺)	1 ml x 1	-20°C

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使用例

実験例1　λ DNA を鋳型にした増幅（200 bp ～ 20 kbp）

	M 1： Gene Ladder Wide 1（0.1 - 20 kbp） M 2： OneSTEP Marker 1（λ/Hind III digest） Lane 1： 200 bp Lane 2： 500 bp Lane 3： 1 kbp Lane 4： 3 kbp Lane 5： 5 kbp Lane 6： 8 kbp Lane 7： 10 kbp Lane 8： 15 kbp Lane 9： 20 kbp
0.8% Agarose S

実験例2　 GC-rich な領域の増幅

HeLa 細胞のゲノムDNA を鋳型としApoE 遺伝子の577 bp（GC 含量72%）の領域を増幅した。増幅の際に Betaine（終濃度 0.5 M, 1 M, 1.5 M, 2 M）、DMSO（終濃度 2.5%, 5%, 10%）、Formamide（終濃度 2.5%, 5%, 10%）をそれぞれ反応液に添加した。
本試験では、終濃度5.0%のFormamide を添加した系で目的サイズのDNA 断片を特異的に増幅することができた。（Lane 9 ○印）

	M： Gene Ladder 100 C：添加剤なし Lane 1： 0.5M Betaine 添加 Lane 2： 1.0M Betaine 添加 Lane 3： 1.5M Betaine 添加 Lane 4： 2.0M Betaine 添加 Lane 5： 2.5% DMSO 添加 Lane 6： 5.0% DMSO 添加 Lane 7： 10.0% DMSO 添加 Lane 8： 2.5% Formamide 添加 Lane 9： 5.0% Formamide 添加 Lane 10： 10.0% Formamide 添加
2% Agarose S

実験例3　 PCR阻害物質の存在下における増幅量の比較

λDNA（5 ng）を鋳型として3 kbpを増幅した。その際にフミン酸（腐植酸）、Ethanol、SDSをそれぞれ添加し、PCR阻害物質存在下において増幅量の比較を行なった。20 μl反応系のうち5 μlを電気泳動した。

PCR条件^*1

94℃	2 min.
94℃	30 sec.	25 cycles
55℃	30 sec.
72℃^*2	3 min.
72℃	5 min.

*1 ABI 2720
*2 D社 DNA polymeraseは68℃

フミン酸（腐植酸）添加

	M. Gene Ladder Wide 2 ( 0.1-20kbp) Lane 1. フミン酸 400 ng Lane 2. フミン酸 200 ng Lane 3. フミン酸 100 ng Lane 4. フミン酸 50 ng Lane 5. フミン酸 25 ng Lane 6. フミン酸 5 ng Lane 7. なし 0.8% Agarose S
①Pho DNA Polymerase ②D社 DNA polymerase ③N社 DNA Polymerase

エタノール添加

	M. Gene Ladder Wide 2 ( 0.1-20kbp) Lane 1.Ethanol 10% Lane 2.Ethanol 8% Lane 3.Ethanol 6% Lane 4.Ethanol 4% Lane 5. なし 0.8% Agarose S
①Pho DNA Polymerase ②D社 DNA polymerase ③N社 DNA Polymerase

SDS添加

	M. Gene Ladder Wide 2 ( 0.1-20kbp) Lane 1. SDS 0.04% Lane 2. SDS 0.02% Lane 3. SDS 0.01% Lane 4. SDS 0.005% Lane 5. なし 0.8% Agarose S
①Pho DNA Polymerase ②D社 DNA polymerase ③N社 DNA Polymerase