FL Green Intercalation Mix

LAMP法用インターカレーター試薬（蛍光検出法用）

品名	Code No.	包装単位	価格	備考
FL Green Intercalation Mix	NE6071	750 µl	15,000円	貯法:－20℃, 遮光保存

製造元　（株）ニッポンジーン
販売サイト　e Genome Order

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

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製品説明

FL Green Intercalation mix

FL Green Intercalation Mixは、Loop-mediated Isothermal Amplification（LAMP）法による等温核酸増幅蛍光検出用試薬です。
本品は、二本鎖DNA結合性蛍光色素^*、耐熱性無機ピロホスファターゼを含んでおり、LAMP法により増幅したDNAを蛍光検出装置^**によって検出することができます。
LAMP法用増幅試薬と組み合わせて使用することが可能です(LAMP法用増幅試薬は別途ご用意ください)。

* 励起波長: 450-500 nm (Max. 487 nm), 蛍光波長: 480-560 nm (Max. 503 nm)
** 本品は、リアルタイムPCR装置等の蛍光検出装置に対応した試薬です。蛍光検出装置として、LAMP法用測定装置 LF-8 Plusなどの等温増幅測定装置とリアルタイムPCR装置（LightCycler 96、ABI7500など）が使用できます。LAMP法専用リアルタイム濁度測定装置（栄研化学株式会社 Loopamp EXIA^® 、LA-320C、RT-160C / 株式会社ニッポンジーンエンドポイント濁度測定装置LT-16 ）には使用出来ません。

製品内容

NE6071（750 µl）
構成品	容量	保存	備考
FL Green Intercalation Mix	750 µl x 1	-20°C, 遮光保存

輸送方法

株式会社ニッポンジーンでは、ドライアイス梱包で製品をお届けいたします。納品当日、製品を確実にお受取りいただき、到着次第できるだけ早く－20°Cフリーザーにて保存してください。

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使用例

FL Green Intercalation Mixを使用した蛍光検出

Loopamp^®DNA増幅試薬キット(栄研化学株式会社)との組み合わせ使用例

(1) Loopamp^®DNA増幅試薬キットの組成に、LAMP法用プライマーセット L. londiniensis (Code No. NE2011) および本品を2.5 µL (10x)、Positive Controlとして鋳型DNA、Negative Controlとして蒸留水を添加した反応液 (25 µL)をそれぞれ調製し、リアルタイムPCR装置LightCycler^® 96を使用して、65℃で60分反応を行った。(検出時間: 12.9分)

Figure 1 (a) 増幅曲線

Figure 1 (b) 融解曲線解析

(2) Loopamp^®DNA増幅試薬キットおよびLAMP法用プライマーセット L. londiniensis (Code No. NE2011) 、Positive Controlとして鋳型DNA、Negative Controlとして蒸留水を用いて反応液 (25 µL)をそれぞれ調製し、65℃で60分反応を行った。検出は濁度測定装置を使用した。(検出時間: 15.4分)

Figure 2 増幅曲線

結果

本品を添加することで、LAMP反応を蛍光検出できるようになった。
濁度検出よりも蛍光検出の方が検出時間は早くなった。^***
*** プライマーセットによって、検出時間の短縮幅は異なります。

Loopamp^®DNA増幅試薬キットD (栄研化学株式会社)との組み合わせ使用例 (RT-LAMP)

Loopamp^®DNA増幅試薬キットDに、LAMP法用プライマーセット Mumps Virus (Code No. NE2031) および本品を1.25 µL (20x)、AMV Reverse Transcriptase(ニッポンジーン) 0.5 U、Positive Controlとして鋳型RNA、Negative Controlとして蒸留水を添加した反応液 (25 µL)をそれぞれ調製し、LAMP法用測定装置 LF-8 Plus(ニッポンジーン) にて63℃で40分反応を行った。

Figure 3 (a) 増幅曲線

Figure 3 (b) 会合曲線解析

結果

本品を20xで使用することで、LAMP法用測定装置 LF-8 Plusで蛍光検出による測定が可能であった。
本品を使用して、RT-LAMP反応の検出が可能であった。

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Q & A

蛍光検出に使用できる装置は？: リアルタイムPCR装置やLAMP法用測定装置 LF-8 Plus(ニッポンジーン)などが使用可能です。
FL Green Intercalation Mixを添加したあと、DNA増幅を濁度測定装置で検出できますか？: FL Green Intercalation Mixは、インターカレーターと耐熱性ピロホスファターゼを含むため、ピロリン酸の生成による不溶物質（白濁）の形成は起こりません。濁度測定装置では検出できませんので、リアルタイムPCR装置などの蛍光検出用装置をご利用ください。

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