Uracil-DNA Glycosylase (UNG)
E. coli 由来 ウラシルDNA グリコシラーゼ（UNG）| 品名 | Code No. | 包装単位 | 価格 | 備考 |
|---|---|---|---|---|
| Uracil-DNA Glycosylase (UNG) | 317-09041 | 100 ng | 32,000円 | |
| 品名 | Code No. | 包装単位 | 価格 | 備考 |
|---|---|---|---|---|
| GeneAce Probe qPCR Mix II with UNG | 314-09051 | 1 Set (200 回用) | 51,000円 | リアルタイムPCR 用試薬と本酵素のセット品 |
| GeneAce Probe qPCR Mix II | 313-08823 | 200反応用 (50 μl反応系) | 24,000円 | 本品にUNG は含まれておりません。 |
| GeneAce SYBR™ qPCR Mix II | 313-09423 | 500反応用 (20 μl反応系) | 24,000円 | 本品にUNG は含まれておりません。 |
製造元 （株）ニッポンジーン
表示価格は希望納入価格 (税別) です。
製品説明
本品は、E. coli 由来のウラシルDNA グリコシラーゼ（UNG）です。ウラシルを含むDNA のデオキシリボースとウラシル残基の間のN-グリコシド結合を加水分解し、脱ピリミジン部位をつくります。
UNG は、PCR のキャリーオーバー対策に利用できます。PCR を行う際、UNG 処理を行うことで、前の反応から持ち込まれたPCR 産物（ウラシルを含む）を除くことができます。
UNG処理対応可能なリアルタイムPCR用試薬について
GeneAce Probe qPCR Mix II やGeneAce SYBR™ qPCR Mix II は、dTTPの代わりにdUTPが含まれているため、ウラシルを取り込んだPCR産物が得られます。次のPCRを行う際に、添付のUNGを添加し、PCR前に40℃で2分間のUNG処理を行うことで、鋳型DNAには影響を与えず、キャリーオーバーしたPCR産物を分解することができます。
特長
・ UNGを添加してPCRキャリーオーバー防止！▲このページのトップへ
製品内容
使用回数
200回用（包装単位は50 µl反応系での使用回数です。）
| 構成品 | 容量 | 保存 | 備考 |
|---|---|---|---|
| Uracil-DNA Glycosylase (UNG) | 100 µl x 1 | －20°C | 濃度： 1 ng /μL |
| 構成品 | 容量 | 保存 | 備考 |
|---|---|---|---|
| 2 x GeneAce Probe qPCR Mix II | 1.25 ml x 4 | －20°C（遮光） | 200反応用（製品 Code No. 313-08823） |
| Uracil-DNA Glycosylase (UNG) | 100 µl x 1 | －20°C | 100 ng （製品 Code No. 317-09041） |
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使用例
| UNG (1 ng /μL) | 0.5μl | 0.25μl | |
|---|---|---|---|
| 2X GeneAce Probe qPCR Mix II | 25μl | 12.5μl | (final conc. 1X) |
| 25μM Forward Primer | 1μl | 0.5μl | |
| 25μM Reverse Primer | 1μl | 0.5μl | |
| 10μM TaqMan® Probe | 1μl | 0.5μl | |
| Template DNA | 5μl | 2.5μl | |
| ddWater | up to 50μl | up to 25μl |
| 40°C | 2分 | 1サイクル | UNG 処理 |
|---|---|---|---|
| 95°C | 10分 | 1サイクル | UNG 不活化, PCR 酵素活性化 |
| 95°C | 30秒 | 45サイクル | |
| 60°C | 1分 |
実験例1 UNGの活性確認
各濃度の UNG と dUTPを取り込んだ 1μg のPCR産物（0.5 kb）を 37℃で30分間反応させ、UNG 活性によりDNA が分解されているかアガロースゲル電気泳動で確認した。
結果 ウラシルを含むPCR産物はUNGにより分解された。
実験例2 PCR キャリーオーバーコンタミネーション防止効果の検証
ウラシルを含む PCR 産物を鋳型とし、リアルタイム PCR を行った。 リアルタイム PCR は、UNG の添加量（0μL, 0.1μL, 0.25μL, 0.5μL/反応）を変えて UNG 処理を行ってから、PCR 酵素活性化処理（UNG 不活化）と PCRを行った。
PCR condition： |
40°C 2分→95°C 10分→（95°C 30秒→59°C 1分） x 45サイクル |
Target： |
ダイズ内在性遺伝子 Le1（118 bp） |
PCR volume： |
25 μl |
試薬： |
GeneAce Probe qPCR Mix II |
装置： |
LightCycler® 96（Roche社） |
結果
UNG 添加なしの場合、ウラシルを含む鋳型で増幅が認められたが、UNG 添加ありの場合には増幅は認められず、ウラシルを含むDNAからの増幅を抑制できた。
実験例3 UNGの添加によるリアルタイムPCRへの影響
プラスミドDNA（ウラシルを含まない）を鋳型としたリアルタイムPCRを行い、UNGの添加による増幅効率の比較を行った。
Target： |
ダイズ内在性遺伝子 Le1（118 bp） |
PCR volume： |
25 μl |
試薬： |
GeneAce Probe qPCR Mix II |
装置： |
Applied Biosystemns 7500 Fast System |
UNG添加量： |
0.25 ng/反応 |
結果
増幅曲線および検量線の結果から、UNGの添加によるリアルタイムPCRへの影響は認められなかった。
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Q & A
- UNGの添加量を増やしてもよいですか？
- PCR反応液中へ本酵素の持ち込み量が多くなりすぎるとPCR反応を阻害することがあります。 酵素の使用量は、50 μL の反応液中、0.1～1 μL を目安にしてください。
- 1 step RT-PCR に使用できますか？
- 本酵素は55℃でも部分的に活性を有するため、1 step RT-PCR には使用しないでください。
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資料 Data Sheet
製品マニュアル
SDS(Safety Data Sheet)
リーフレット
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関連情報
備考
- 本品は試験研究用試薬です。医薬品の用途には使用しないでください。
関連製品
- GeneAce SYBR™ qPCR Mix II （SYBR Green検出系リアルタイムPCR試薬）
- GeneAce Probe qPCR Mix II（蛍光標識プローブ検出系リアルタイムPCR試薬）
- GeneAce RL qPCR Mix with UNG (インターカレーター法用リアルタイムPCR 試薬)
- GeneAce Reverse Transcriptase（RNase H-） 逆転写酵素
- スタンダードオリゴ合成サービス プライマー合成（オリゴ合成専用サイト）
- Double-Dye Probe (FAM/TAMRA) 合成サービス プローブ合成（オリゴ合成専用サイト）
問い合わせ先
- 購入に関するお問い合わせ先
- 富士フイルム和光純薬株式会社および同社代理店・特約店
- 富士フイルム和光純薬株式会社 製品検索サイト
- 製品に関するお問い合わせ先
- 株式会社ニッポンジーン 学術営業課
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